當(dāng)前位置：.搖瓶培養(yǎng)
篩選的全過程都要通過搖瓶培養(yǎng)。搖瓶培養(yǎng)是通過搖床振蕩，使菌體與培養(yǎng)基和空氣充分接觸而獲得營養(yǎng)和氧氣。搖瓶培養(yǎng)的優(yōu)點是培養(yǎng)條件與發(fā)酵罐接近，這樣選育出來的菌株容易推廣到大中去。ELISA試劑盒
搖瓶培養(yǎng)通常可分為初篩和復(fù)篩。初篩由于菌株較多，常一個菌株接一個搖瓶，進行振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后逐個進行活性測定，將能力高的菌株用砂土管或冷凍管保藏。待初篩結(jié)束后，再將砂土管或冷凍管菌種接人斜面，進一步進行搖瓶復(fù)篩．此時一個菌株要接3～5個搖瓶，以提高性。
選育高產(chǎn)菌種的zui終目的是要應(yīng)用到上去，因此，搖瓶的培養(yǎng)條件要盡量與發(fā)酵罐接近。
搖瓶篩選實際上是各菌株之間的對比試驗，因此，有關(guān)搖瓶培養(yǎng)的各種條件要力求一致，如搖瓶型號、裝量、瓶塞厚度或瓶El包扎紗布的層數(shù)、搖床轉(zhuǎn)速、溫度等。
2.產(chǎn)物活性測定
產(chǎn)物活性測定是菌種篩選的重要組成部分，也是決定篩選數(shù)量的主要因素之一。一般來說，初篩的菌株數(shù)越多，就越有可能篩選到優(yōu)良菌株。因此擴大篩選量是提高育種效率的一個重要方面，在篩選工作中建立一個簡便、快速而又較準(zhǔn)確的檢測方法也就顯得十分重要了。下面介紹幾種在搖瓶初篩中常用的快速測定代謝產(chǎn)物的方法。
()瓊脂平板孔洞法 以代謝產(chǎn)物為酶類的突變株的篩選為例。將一定量的底物和瓊脂做成厚約3mm的平板，待凝固后，用直徑5mm的打孔器取出瓊脂塊，使平板上留下50～60個圓孔。然而加入過濾或離心后的發(fā)酵液IOF．L，置于底物作用的溫度下，培育20~25h，在孔洞周圍出現(xiàn)水解圈。根據(jù)水解圈的大小和清晰度決定取舍。ELISA試劑盒
(2)紙片法取直徑為0．5cm的圓形濾紙片，滅菌后覆蓋于含有底物或檢定菌的瓊脂板上，吸取～2pL發(fā)酵液于濾紙上，置一定溫度下培養(yǎng)一定時間，測定水解圈或抑菌圈的大小。
(3)瓊脂薄層紙片法瓊脂薄層紙片法適合于抗真菌抗生素和農(nóng)用抗生素產(chǎn)生菌的初篩，是一種與生物相關(guān)性較強的初篩方法。它是一種符合大量菌株和以多種產(chǎn)孢子的真菌、病原菌為對象的綜合篩選方法。
制備病原菌的孢子懸液，加入到45~50℃的真菌培養(yǎng)基中，混勻，傾人到玻璃板上，均勻攤平，制成約cm厚的薄層瓊脂板。將圓形濾紙片覆于薄層瓊脂上，加入～2μL發(fā)酵液，編號。在玻璃板兩端各放上一塊條狀的玻璃作為墊子，上面蓋一塊滅菌過的玻璃板。放入搪瓷盤內(nèi)，置適宜的溫度下培養(yǎng)。置于解剖鏡或立體顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)、菌絲形態(tài)，并測量抑菌圈大小。
3.搖瓶數(shù)據(jù)的調(diào)整和有關(guān)菌株特性的觀察分析
搖瓶試驗的測定數(shù)據(jù)是否準(zhǔn)確直接關(guān)系到高產(chǎn)菌株的篩選頻率。搖瓶試驗的誤差來自兩個方面：一是搖瓶條件的不一致；二是檢測過程的誤差。對搖瓶發(fā)酵液的測試數(shù)據(jù)要盡量用生物統(tǒng)計方法來處理，以便在復(fù)雜的數(shù)據(jù)中去偽存真，抓住本質(zhì)。在分離、篩選和整個試驗過程中，每個階段都要周密地觀察菌株特性。ELISA試劑盒
4.培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化
高產(chǎn)表型是由基因型和環(huán)境相互作用共同決定的，通過誘變育種得到的高產(chǎn)菌株具有高產(chǎn)基因型，但出發(fā)菌株的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件對高產(chǎn)菌株來說并非。因此，高產(chǎn)菌株選育之后，需對高產(chǎn)菌株的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，以充分發(fā)揮高產(chǎn)菌株的高產(chǎn)潛力。可用單因子法、正交試驗法、均勻設(shè)計、響應(yīng)面法等方法進行培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化。
